基因組編輯供體載體及克隆服務(wù)

同源重組（HR）是一種修復(fù) DNA 雙鏈斷裂（DSB）的自然機(jī)制。靶向特定位點(diǎn)的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 體系能夠在基因組上生成 DSB，觸發(fā) DNA 的自然修復(fù)機(jī)制，誘導(dǎo)基因組與供體 DNA 之間發(fā)生同源重組（HR），將供體DNA 片段整合到基因組上的靶標(biāo)位點(diǎn)來(lái)修復(fù) DSB。

這個(gè)過(guò)程對(duì)基因組編輯操作具有極大的價(jià)值。按照實(shí)驗(yàn)需求構(gòu)建的各種供體質(zhì)粒能在基因組序列中引入多種的修飾。研究者能通過(guò)整合報(bào)告基因或篩選標(biāo)記干擾基因的編碼區(qū)序列，達(dá)到基因敲除的目的，或通過(guò)敲入突變序列進(jìn)行各種閱讀框操作，或者在內(nèi)源基因序列上融合標(biāo)簽以對(duì)基因進(jìn)行追蹤等等。

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圖1. 同源重組介導(dǎo)的基因組編輯

通過(guò)CRISPR/TALEN工具制造DNA 雙鏈斷裂介導(dǎo)同源重組，將供體克隆上的報(bào)告基因和篩選標(biāo)記表達(dá)結(jié)構(gòu)靶向整合到基因組上的目標(biāo)位點(diǎn)。

供體載體

GeneCopoeia 提供標(biāo)準(zhǔn)或客戶定制的供體克隆載體，用于基因敲除、突變修飾、融合標(biāo)簽及其他方面的應(yīng)用。我們提供帶有不同元件的多種載體骨架，可供客戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。

    兩個(gè)多克隆位點(diǎn)（MCS），用于裝載左側(cè)及右側(cè)同源臂序列。

    含GFP（可選）等報(bào)告基因，用于陽(yáng)性克隆細(xì)胞分選。

    含篩選標(biāo)記，如嘌呤霉素和新霉素抗性基因，用于篩選陽(yáng)性克隆。

    含TK 篩選標(biāo)記（可選），用于負(fù)篩選去除含有隨機(jī)整合的克隆。

    含 LoxP 位點(diǎn)（可選），方便在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中通過(guò)Cre-LoxP重組去除整合到基因組中的篩選標(biāo)記或報(bào)告基因序列。

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供體克隆服務(wù)

GeneCopoeia 也提供供體克隆設(shè)計(jì)及/或客戶定制服務(wù)以及基因組編輯項(xiàng)目咨詢服務(wù)。請(qǐng)點(diǎn)擊填寫(xiě)表格詢價(jià)。

基因敲除供體克隆

如圖所示的供體克隆設(shè)計(jì)構(gòu)建服務(wù)是用于同源重組介導(dǎo)的基因敲除。這類(lèi)供體克隆能將篩選標(biāo)記/報(bào)告基因表達(dá)結(jié)構(gòu)敲入基因組上的靶點(diǎn)，既破壞了基因的閱讀框達(dá)到敲除的目的，也使得藥篩或熒光分選陽(yáng)性細(xì)胞系成為可能。這種方法特別適合應(yīng)用于轉(zhuǎn)染效率偏低的細(xì)胞系，而且同源重組介導(dǎo)的基因敲除還有突變序列已知的優(yōu)點(diǎn)。

用于條件性基因敲除、突變修飾和融合標(biāo)簽的供體克隆

如圖所示的供體克隆設(shè)計(jì)構(gòu)建服務(wù)是用于同源重組介導(dǎo)的基因敲入應(yīng)用。這類(lèi)應(yīng)用包括1）條件性基因敲除（在外顯子兩端插入loxP位點(diǎn)，可利用Cre-loxP重組反應(yīng)敲除該外顯子）；2）基因突變修飾（通過(guò)改變特定堿基突變野生型的基因，或?qū)⑼蛔兓蛐迯?fù)回野生型）；3）基因融合標(biāo)簽（在基因的5‘或3’插入融合標(biāo)簽蛋白的基因）。此類(lèi)供體克隆構(gòu)建服務(wù)請(qǐng)?zhí)顚?xiě)以下表格詢價(jià)。

基因組編輯克隆