| 貨號 | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 形式 | 說明書 |
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產(chǎn)品信息
相關(guān)產(chǎn)品
NGSquant? Library qPCR kit for Illumina?
NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?是一種基于 qPCR 方法對 Illumina 平臺測序文庫進(jìn)行 DNA 分子數(shù)絕對定量分析的試劑盒。它可以對兩端含有 Illumina P5、P7 芯片序列的各種類型 DNA 片段文庫進(jìn)行高特異性的快速定量，檢測結(jié)果靈敏度高，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，適用于大多數(shù)qPCR儀器。
產(chǎn)品優(yōu)勢
靈敏度高 —能檢出低至 0.0002 pM 的文庫樣品；
特異性強(qiáng) —使用抗體修飾法熱啟動 DNA 聚合酶，避免了 PCR 擴(kuò)增前的非特異性結(jié)合；文庫定量引物采用特殊算法設(shè)計，不會形成引物二聚體；
擴(kuò)增范圍廣—能檢測平均片段長度 1 kb 以內(nèi)的文庫；
擴(kuò)增效率高（E>0.92），實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好（R2 >0.99）。
本試劑盒包含以下四種成分：
1. 文庫DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品（qPCR DNA standard for Illumina）：經(jīng)過梯度稀釋的六份十倍比梯度稀釋的雙鏈DNA片段溶液（20 pM-0.0002 pM），經(jīng)過絕對定量和嚴(yán)格質(zhì)控，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制作；
2. 文庫定量引物（qPCR primer Mix for Illumina）：含有 Illumina P5，P7 芯片序列并經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計的一對qPCR引物；
3. 2×qPCR預(yù)混液（2×qPCR Mix for Illumina?）：含有性能優(yōu)化的抗體修飾法DNA聚合酶、qPCR反應(yīng)緩沖液和SYBR Green染料等qPCR反應(yīng)所需成分；
4. ROX參比染料（ROX Reference Dye）。
圖1. DNA標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增曲線與熔解曲線。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?檢測6個10倍梯度稀釋的文庫DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品，每個標(biāo)準(zhǔn)品平行重復(fù)2次。結(jié)果顯示，試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特性。
圖2. 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?擴(kuò)增文庫DNA標(biāo)準(zhǔn)品得到的qPCR產(chǎn)物，電泳分析無非特異擴(kuò)增現(xiàn)象。
圖3.兩款試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品的對比。將GeneCopoeia的NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?和KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms的標(biāo)準(zhǔn)品用BlazeTaq NGS qMix在ABI ViiA 7進(jìn)行擴(kuò)增。 兩套標(biāo)準(zhǔn)品擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本重合，對應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的△Ct＜0.3。
圖4：文庫擴(kuò)增效率: 對不同類型的10種illumina文庫使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?分別檢測，每個文庫樣本進(jìn)行6個梯度的10倍稀釋，計算出的擴(kuò)增效率如上圖顯示，10個文庫的擴(kuò)增效率均在90%-110%的范圍內(nèi)，與擴(kuò)增DNA標(biāo)準(zhǔn)品的效率相近。