GeneHero? CRISPRi 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
GeneHero?預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株是穩(wěn)定表達(dá)dCas9-KRAB融合蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,用于研究?jī)?nèi)源性基因的轉(zhuǎn)錄抑制。這些CRISPRi細(xì)胞株已穩(wěn)定整合人密碼子優(yōu)化的dCas9,并與轉(zhuǎn)錄抑制肽KRAB融合,以沉默靶基因的表達(dá)。
GeneHero? CRISPRi預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株為dCas9-KRAB穩(wěn)定表達(dá)的單克隆細(xì)胞株。使用時(shí)只需簡(jiǎn)單地將啟動(dòng)子靶向的sgRNA或CRISPRi sgRNA文庫(kù)導(dǎo)入CRISPRi細(xì)胞系,是研究基因表達(dá)抑制和基因篩選的理想方法。
在GeneHero? CRISPRi細(xì)胞系進(jìn)行CRISPRi轉(zhuǎn)錄抑制驗(yàn)證
如上圖所示,在表達(dá)dCas9-KRAB的Hela細(xì)胞(Cat#SL372)中,用qPCR檢測(cè)了DPH2的轉(zhuǎn)錄抑制情況。轉(zhuǎn)導(dǎo)sgRNA的細(xì)胞株的擴(kuò)增曲線為紅色,無(wú)sgRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞為藍(lán)色(圖A)。目的基因的轉(zhuǎn)錄水平與GAPDH的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了比較,通過(guò)與不轉(zhuǎn)染sgRNA的細(xì)胞系比較,表明目的基因在SL372中的轉(zhuǎn)錄倍顯著抑制(圖B)。
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