| 貨號 | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 形式 | 說明書 |
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產(chǎn)品信息
相關(guān)產(chǎn)品
CytoCt? Cell Lysis Kit
CytoCt? RT-qPCR體系應(yīng)用于試管或96孔板培養(yǎng)的10-100,000細胞基因表達水平的檢測，該體系無需任何RNA純化，操作更簡便、快捷，靈敏度更高，實驗數(shù)據(jù)更可靠。傳統(tǒng)的方法是對培養(yǎng)細胞進行提取和純化RNA，然后用RT-qPCR體系進行基因表達定量和分析。CytoCt? RT-qPCR體系在96孔板或其他形式培養(yǎng)的細胞中制備細胞裂解物，無需RNA提取步驟，細胞裂解物通過two-step或者one-step RT-qPCR，在約1.5h即可完成基因定量檢測。
GeneCopoeia提供的CytoCt? RT-qPCR體系包括：CytoCt? cell lysis buffer（只含裂解液）、CytoCt? cDNA synthesis kit（含裂解液、cDNA合成試劑）和CytoCt? One-Step RT-qPCR kits（含裂解液、一步法RT-qPCR試劑）。
產(chǎn)品優(yōu)勢
操作簡便：在96孔板或試管中快速地將細胞裂解，無需RNA提取，裂解物可直接進行基因定量檢測
靈敏度高：可對10-100,000細胞裂解物進行有效的基因檢測
兼容性：CytoCt? RT-qPCR系統(tǒng)兼容SYBR Green和Probe檢測體系
重復(fù)性：實驗步驟少，孔間的操作誤差減少，實驗結(jié)果具有更高的重復(fù)性
操作流程
將細胞培養(yǎng)到所需的細胞數(shù)，然后加入裂解液，在室溫下孵育10分鐘。轉(zhuǎn)移到PCR板上，運行程序：25℃ 2分鐘，37℃ 5分鐘，75℃ 10分鐘。裂解物可以直接進行RT-qPCR反應(yīng)，或者儲存起來以備將來使用。
圖一：CytoCt? RT-qPCR體系的靈敏度（試管、96孔板）。
A.在試管中的應(yīng)用，使用GeneCopoeia、Ambion或BioRad的裂解緩沖液裂解HCT116細胞，使用GAPDH基因進行RT-qPCR分析。取濃度范圍為5 ~ 5000個細胞每微升的懸浮細胞與裂解緩沖液混合，按照各產(chǎn)品的操作說明書進行處理。每RT-qPCR反應(yīng)使用2μl細胞裂解液(相當(dāng)于1-1000個細胞每反應(yīng))。
B.在96孔板中的應(yīng)用，H1299細胞接種于96孔板中，密度梯度為每孔250 ~ 5000個細胞。培養(yǎng)96小時后，每孔的最終細胞數(shù)估計約為2500~ 50000個細胞，向孔板中加入裂解緩沖液，按照操作說明書進行處理。每RT-qPCR反應(yīng)使用2μl細胞裂解液(相當(dāng)于10-200個細胞每反應(yīng))。
圖二：使用常規(guī)RNA提取法及CytoCt?裂解法分別處理相同數(shù)量的細胞，通過One-Step RT-qPCR檢測基因表達情況。每個反應(yīng)的細胞量約為1500個。A. 檢測HCT116細胞中的42個基因。B. 檢測H1299細胞中的37個基因。
圖三：使用Genecopoeia（縱坐標(biāo)）和BioRad（橫坐標(biāo)）的lysis buffer分別處理相同數(shù)量的細胞，通過One-Step RT-qPCR檢測基因表達情況。每個反應(yīng)的細胞量約為1500個。A. 檢測HCT116細胞的43個基因。B. 檢測H1299細胞中的37個基因。
圖四：在96孔板中使用細胞裂解液進行多基因檢測。將3000 – 5000個HEK293細胞接種在96孔板中培養(yǎng)，至細胞達到70% – 90%的豐度。分別使用GeneCopoeia、BioRad的裂解液以及RNA提取試劑按使用說明處理等量細胞，使用一步法RT-qPCR試劑，檢測8個基因的表達。